Bloqueio da atividade nucleolar em células germinativas masculinas e suas consequências para a espermatogênese.

Abstract

A espermatogênese é o processo em que uma célula germinativa passa até se transformar em espermatozoide. O corpo cromatóide (CB) é uma estrutura típica de células germinativas masculinas localizado próximo ao núcleo celular com função de estocar RNA e proteínas que atuarão na espermiogênese. Uma das principais proteínas presentes no CB é chamada MVH (Mouse Vasa Homologue), entre outras. No núcleo há uma estrutura conhecida como nucléolo a sua principal função que é sintetizar RNAr e montar ribossomos, sendo a fibrilarina uma proteína presente no seu componente fibrilar denso e importante para que o nucléolo desempenhe esse papel. CBs e nucléolo tem papeis cruciais na espermatogênese. No presente estudo foi bloqueada a atividade do nucléolo com a droga BMH–21 para observar o desenvolvimento do CB e, assim, verificar a importância de uma estrutura para com a outra. Com cultivo in vitro de túbulos seminíferos obteve-se o material de estudo. As culturas foram analisadas por três métodos: Western blot (WB), para avaliar a expressão das proteínas MVH, Fibrilarina, CLOCK (circadian locomoter output cycles protein kaput) e BMAL1 (brain and muscle ARNT-Like 1); Impregnação por nitrato de prata, para analisar nucléolos; e imunofluorescência (IF), para analisar a morfologia das estruturas estudadas e a intensidade de marcação das proteínas. Por WB foi observado que nos grupos controles a proteína MVH e fibrilarina mostraram relação, enquanto uma diminuía a outra aumentava. Nos grupos tratados com a droga BMH-21 ocorreu o bloqueio nucleolar e este bloqueio faz com que, independente da suplementação, a célula tenha um acúmulo de MVH e BMAL1, evidenciando uma relação entre o bloqueio nucleolar e corpo cromatóide. A redução da atividade nucleolar também afetou a fisiologia e a organização dos CBs, o que por sua vez, pode ter influenciado negativamente a capacidade reprodutiva das células germinativas dos grupos tratados com BMH-21. Estudos já comprovaram que os genes CLOCK e BMAL1 codificam proteínas que ao serem sintetizadas, se unem formando um heterodímero. Esse heterodímero ativa uma cascata de reações metabólicas e o funcionamento de outros genes necessários para a manutenção do ciclo virgília-sono. Uma vez que um desses genes não atue na produção como deveriam de suas proteínas, essa cascata de reação não ocorre gerando um desequilíbrio fisiológico e consequentemente outras alterações, incluindo no CB, sendo que já encontraram acumulo de proteína desses dois genes nesta estrutura e que o bloqueio do gene BMAL1 ocasionou diversas alterações morfológicas.