DESCRIÇÃO DA EXPRESSÃO DA PROTEÍNA NUCLEOLAR FIBRILARINA EM TÚBULOS SEMINÍFEROS DE CAMUNDONGOS MACHOS (Mus musculus) EM DIFERENTES ESTÁGIOS DE DESENVOLVIMENTO E SUAS INTERAÇÕES FÍSICAS COM COMPONENTES MOLECULARES DE CHROMATOID BODIES

Abstract

O corpo cromatóide (CB) é uma estrutura citoplasmática de células germinativas masculinas que tem sido descrito como tendo um papel no armazenamento de RNA e de proteína para a diferenciação final dos espermatozóides. Estudos recentes indicam que alguns destes componentes citoplasmáticos de complexos macromoleculares têm origem nucleolar, tais como a proteína nucleolar Fibrilarina (B36), que tem uma função no componente fibrilar denso (CFD nucleolar) e controlar o metabolismo do RNAr. Os objetivos do presente estudo foi o de controlar a expressão da proteína nucleolar Fibrilarina em túbulos seminíferos em diferentes estágios do ciclo espermatogênico (I-III; IV-VI, VII-IX, X-XII); e para verificar a distribuição da proteína nucleolar Fibrilarina durante a montagem do CB no citoplasma das células germinativas em túbulos seminíferos nos estágios IV-VI, e também sua interação com dois marcadores de CB bem conhecidos (MIWI e HSP70) que desempenham papéis distintos para a manutenção da fisiologia do CB. Túbulos seminíferos em diferentes estágios do ciclo de espermatogênese foram isolados por microscopia de transluminescência (I-III: segmentos mais claros; IV-VI: segmentos de cores médias, VII-IX: segmentos de coloração mais intensa; X-XII: segmentos transparentes) a partir de testículos de 10 camundongos machos adultos (Mus musculus). A expressão da Fibrilarina e também a co-localização entre Fibrilarina e MIWI / HSP70 foram realizadas por Western blot (WB) e por imunofluorescência (IF). O total de proteínas a partir de testículos de 05 ratos adultos machos foram utilizados para realizar a coimunoprecipitação de proteínas (CO-IPP). Os resultados demonstraram uma maior expressão da Fibrilarina em túbulos seminíferos nas fases IV-VI do ciclo espermatogênico (WB), e uma co-localização parcial da proteína nucleolar Fibrilarina com MIWI (uma proteína que tem um papel ativo no metabolismo de RNA no CB) , e também com HSP70 (uma proteína que tem um papel no dobramento proteossômico no CB) (IF). Também foi realizada uma CO-IPP entre Fibrilarina e MIWI; e entre Fibrilarina e HSP70 e com o objetivo de encontrar uma melhor resposta para a existência de uma interação física entre esses componentes do CB e a proteína nucleolar Fibrilarina. Encontramos MIWI no precipitado através da CO-IPP, mas não conseguimos precipitar HSP70. Os nossos resultados mostram que a proteína nucleolar Fibrilarina participa nas atividades fisiológicas realizadas por CB, interagindo com CB componentes que têm um papel no metabolismo de RNA (como, por exemplo, proteína MIWI). Portanto, é provável que a associação entre MIWI e Fibrilarina possa estar relacionada com a atuação destas duas proteínas em eventos relacionados à modificações epigenéticas que regulam a transcrição de RNAm e RNAr em células da linhagem germinativa masculina, controlando portanto dois eventos importantes para a diferenciação dos espermatozoides, que são a formação do CB e o ciclo nucleolar.