AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DA GRP78 EM FÍGADO DE RATOS SUBMETIDOS À ADMINISTRAÇÃO CRÔNICA DE FLUORETO

Abstract

O íon fluoreto (F- ) pode desempenhar efeitos distintos sobre várias funções celulares. Dentre elas, a perturbação no sistema antioxidante que já foi relatada na literatura. O aumento da expressão da proteína reguladora da glucose 78 (GRP78) é um indicativo de estresse oxidativo do retículo endoplasmático. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar a expressão da proteína GRP78 após exposição do Fpor diferentes doses e períodos experimentais, utilizando a técnica de western blot. Foram utilizados 36 ratos Wistar machos com 21 dias de vida, os quais foram divididos em 6 grupos (n= 6 animais por grupo), de acordo com a dose de Fa ser administrada na água de beber [0 mg/L (controle), 15 mg/L, ou 50 mg/L] e o tempo de tratamento (20 ou 60 dias). Decorridos os períodos experimentais, os animais foram anestesiados, o sangue e o fígado foram coletados para a análise de Fno plasma e para a quantificação da GRP78, respectivamente. A análise de Ffoi feita como descrito pelos autores TAVES e WHITFORD. As amostras de fígado foram pulverizadas, seguida da extração de proteínas com a solução RIPA acrescida de um coquetel de inibidor de proteases. As proteínas totais foram quantificadas pelo método de BRADFORD e parte foi submetida à eletroforese para a sua separação. A seguir, as proteínas foram transferidas para uma membrana de nitrocelulose e incubadas com anticorpos anti-GRP78 ou anti-tubulina. A análise quantitativa foi realizada por densitometria utilizando o software Image Studio Lite. Os resultados demonstram um aumento significativo da expressão da GRP78 nos grupos tratados com 15mg F/L e 50mg F/L em relação ao grupo experimental, mas não mostrou diferença entre os períodos experimentais nos períodos de 20 e 60 dias. Não havendo diferença entre os dois tempos experimentais. Esses dados sugerem que a GRP78 pode ser um indicador do estresse oxidativo no reticulo endoplasmático induzido pelo F-, de maneira independente da dose.